第11期精选论文之二: 基于化学酶法的糖蛋白N-糖链检测

蛋白质的糖基化是真核细胞中最常见的翻译后修饰，在蛋白质相互作用、分子识别、免疫应答、信号传递等关键生物学过程中发挥重要作用。生物体内糖基化位点以及糖基化水平的异常与多种疾病密切相关，如肿瘤的发生和转移、神经退行性疾病、代谢相关疾病等。目前已有很多糖蛋白质作为生物标记物或药物靶标用于临床疾病的预警、诊断和治疗。糖链分析作为糖基化研究的重要内容，对于深入认识糖基化的多样性和生物功能具有重要意义。

糖蛋白N-糖链的常用分析过程为：首先用蛋白酶（如N-糖苷酶F）释放糖蛋白的糖链，获得糖链与蛋白混合物，然后用凝集素亲和法、亲水作用色谱法及硼亲和法等对糖链进行富集纯化，最后以质谱对其结构进行分析。因糖链的亲水性强、离子化效率低，通常需对其进行化学衍生化以更有效地检测糖链。

Endo-M N175Q以其温和的反应条件、高度的空间区域选择性，避免了化学合成所需的繁琐步骤，成为合成带有均一糖链的糖蛋白和糖肽的研究热点，但N-糖链分析方面的应用报道甚少。延边大学长白山生物资源与功能分子教育部重点实验室金东日教授课题组利用丙酮富集糖肽方法从糖蛋白的胰蛋白酶酶解液中分离糖肽，合成带GlcNAc的受体，利用Endo-M N175Q的转糖基活性，将糖肽的糖链转移到受体上，并利用液相色谱-质谱（LC-MS）对其进行检测。该方法较为简便，可在温和的条件下将带特定基团（如易质子化，同位素标记）的标签和糖肽的寡糖链直接连接，从而得到较好的糖链色谱分离和高灵敏质谱检测，可进行糖链的相对定量分析。该研究获得国家自然科学基金（21365022，21565027）资助。相关成果发表于《分析测试学报》2018年第11期。

doi: 10.3969/j.issn.1004-4957.2018.11.005

【引用本文】 陈奕彤，张斯然，张春波，金东日. 基于Endo-M N175Q糖链转移反应与丙酮富集糖肽的LC-MS分析糖蛋白N-糖链[J]. 分析测试学报, 2018, 37(11): 1311-1315.

【Cite this article】 CHEN Yi-tong，ZHANG Si-ran，ZHANG Chun-bo，JIN Dong-ri.LC-MS Analysis on N-glycans in Glycoproteins Based on Transglycosylation Reaction of Endo-M N 175Q and Acetone-precipitated Glycopeptide Enrichment[J]. Journal of Instrumental Analysis, 2018, 37(11): 1311–1315.

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